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                MSC无血清培养基
                MSC无血清培养基
                英文名称:MSC NutriStem® XF Medium 无血清培养基总访问:509
                国产/进口:进口半年访问:1
                产地/品牌:以色列/Biological Industries产品类别:血清/培养基
                规       格:05-200-1A/B 基础培养基, 05-201-1U/06营养添加物 最后更新:2019-12-23
                货       号:
                CAS   号:
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                销售商: 上海逍鹏生物科技有限大唐娱乐彩票app 查看该大唐娱乐彩票app所有产品 >>
                • 产品介绍
                • 大唐娱乐彩票app简介

                间充质干细胞无血清培养基

                MSC NutriStem® XF Medium

                产品描述:

                •  EU注册证号:DE/CA22/419-33 IVD。

                • 同时取得美国FDA DMF注册号(No:29469) ,多个单位已用于临床二、三期验证。

                • 为多种原代/传代来源的hMSC(骨髓、脂肪组织、脐带)培养■特别开发。

                • 此hMSC培养体系,无血清、无异源动物成分,且能保持hMSC典型特征,在细胞治疗和组织工程中具有高品质高稳定性。 

                产品明人面前不說假話说明书:
                ​一、目的:利用间充质干细胞无血清培养基培养分离脐带间充质干细胞。

                二、材料:新生儿脐带

                三、主要仪器:医用手术器械,生物安全柜,CO2培养箱,6孔培养板,T25培养瓶

                四、试剂:

                1 MSC NutriStem® XF Medium

                用途 品牌 货号 名称 规格 保存条件
                MSC培养基 BI 05-200-1A MSC无血清 好強基础培养基 500m 4℃
                BI 05-201-1U MSC无血清添加剂 3ml -20℃
                细胞贴壁 BI 05-752-1F MSC贴壁试剂 1 ml 4℃
                BI PLTGOLD010R 血小板裂●解物 10ml -20℃
                已知血小板裂解物含有大量的☆外泌体,用户可依照实验目的□ 选用合适的贴壁试剂。
                细胞传代 BI 03-079-1A 重组胰酶-EDTA 500ml RT
                BI 03-048-1C 大豆胰酶抑制剂 20 ml -20℃
                BI 02-023-1A DPBS缓冲液 500 ml RT
                辅助试剂 BI 05-713-1B D10 冻存液 100 ml 4℃
                BI 03-031-1B 青链双抗 100ml -20℃


                五、实验』前准备:

                5.1完全培养基的准备

                5.1.1冻存的MSC NutriStem® XF Supplement在室温或2-8℃解冻,避免反复冻融一陣陣轟鳴聲響起。

                5.1.2配制:MSC NutriStem® XF Basal Medium(培养基):MSC NutriStem® XF Supplement(添加物):青链双抗=500ml:3ml:5ml,4℃保存,2周内使用。

                注1:双抗非必须,建议原代(P0)时使用。

                注2:培养基含L-Glutamine,贮藏时避免◣长期照光。

                5.2包被培养皿

                或跳过此步※骤,直接加2%血小板裂解物,促进MSC细胞贴壁与出手對付蟹耶多【1】生长。

                5.2.1使用DPBS溶液(货号:02-023-1A),将MSC贴壁试剂稀释100倍(1:100)。

                5.2.2参照表3,加入适量的1X MSC贴壁试剂涂层培养皿或何林跟百曉生正盤膝恢復板。

                表3  涂层过¤程中贴壁试剂建议使用量

                 

                培养器皿

                表面积cm2/孔或瓶

                1X MSC贴壁试剂使用体积

                96孔板

                0.34

                0.05~0.1 ml

                24孔板

                1.9

                0.2~0.4 ml

                12孔板

                3.9

                0.4~0.8 ml

                6孔板/ 35 cm培养皿

                9.6

                1~2 ml

                T25瓶/ 60 cm培养皿

                25

                2.5~5 ml

                T75瓶

                75

                7.5~15 ml

                注1:涂层的培养皿需在无菌条∏件下2℃-8℃储存,需在一周内使用。(标示红色为原厂建议身上九彩光芒爆閃而起使用量,经过实验测试后可减半使用)

                注2:包被期间, 注意包被液不可以干掉!

                3:若使用预包被培养瓶(Corning的CellBind系列,或NEST TC处理系列), 步骤5.2的包被可略过。

                5.2.3轻轻摇动培养皿,确认贴壁果然是奇妙试剂均匀分布在培养皿表面后,用封口膜包裹涂层的培养皿。

                5.2.4在2-8℃孵育过夜;或者在CO2培养箱,37℃,至少孵育30分钟。

                5.2.5接种前, 吸除贴壁试剂,再用DPBS轻轻冲洗天價培养皿,即可接种细胞。

                5.3制备1X大豆胰酶抑制剂

                5.3.1使用无↓菌的DPBS,将50X大豆胰酶抑制剂(03-048-1C)稀释成1X。

                六、使用范例:

                6.1 UC-MSC原代培养 (组织块法)

                6.1.1无菌条件下取新鲜脐带,用DPBS漂洗你說我怕你泄露出去嗎净血迹

                * 一般脐带取▼得非无菌环境,可以稍微用75%酒精润洗。

                6.1.2置250px 培养皿中,剪成1~50px脐段,剔除血管,用DPBS洗净血迹,再剪成1mm3组织块。(图 1)

                6.1.3用无菌滴管吸取少量细小组织块均匀散布在 6 孔板 2 个孔中。

                6.1.4 37℃,5%CO2培养箱孵育 30min,以使组织块粘贴在培养皿那冷光和洪六在中途不可能什么危險都遇不到吧壁上。

                6.1.5 向每孔滴加0.8ml 完全培养基 (注意沿孔壁小心滴笑著點了點頭加,勿使冲动组织块)。

                6.1.6 37℃,5% CO2 培养箱孵育过夜,次日 (D1) 每孔再补【加1ml 完全培养基。

                6.1.7 37℃,5% CO继续培养,5天 (D6) 后半量换液 (此时一般看不到大棒陡然出現在黑熊王手中细胞,但最快3天就◥可看到细胞从组织边沿爬出)。

                6.1.8再过5天后半量换液 (此时一般会有细◇胞爬出,但最晚可到14天会出现细胞響起之前有一段時間从组织边沿爬出) (图2、图3)。

                6.1.9每2天换一次培养液,继续培养2~4天,待细胞融合度(Confluency)达到约80%后传代肖狂刀培养(图4)。

                注1:组织块培养的︽关键是要保障组织块始终贴壁,换液动作要尽可能轻微,避免冲动组织块。培养基加〖量不能太多,以免组织块漂浮。

                6.UC-MSC原代培养 (消化法)

                MSC NutriStem® XF Medium也能有效地培养 小唯一頓消化法取得的原代细胞,操做方式可依各实验室的实验步骤,或参考上海逍鹏MSC ACF Tissue Digestive Mix (货号:C35010010) 的使※用说明。

                6.2.1 将脐带用DPBS漂洗干净,剪成1-50px,后剔除血管。

                * 一般速度趕過去脐带取得非无菌环境,可以稍微用75%酒精润洗。

                6.2.2将组织剪成3-5mm3后,移入50ml离心管,再加一塊神石而已入的分离液。

                * 一条长度10公分的脐带建议加入▅10ml的分离液;或者组织块 : 分离液(vol)= 1:1。

                ** 视情况而定,可⊙自行在分离液中添加1%青链双抗(BI, Cat# 03-031-1B)。

                6.2.3把50ml离心管横放在37度细胞培养在遠古神域箱,过夜反应(16小时)。

                * 若总反应体积较大,也可持续旋转混合。

                6.2.4加入和分离液等①体积的0.05%EDTA(BI, Cat#03-015-1B)终止反应后,1500 xg离心5分钟,去除上清。

                * 溶液比较浓稠,小心不要影响下层為什么會變成這樣的细胞;建议留下5ml左右的溶液。

                ** 若是脂肪组左右護法织,没有粘稠的情形,以常规的200-300 xg离心即可。

                *** 没有EDTA, 可使用无钙镁DPBS取代;此时建议后面步骤6多重复2-3次,以确实去除♀酵素。

                6.2.5以和分离液等体积的无钙镁DPBS重悬细六九雷劫胞后,500 xg离心5分钟,去除上清。

                6.2.6再次以和分离液等体积的无钙镁DPBS重悬细胞后,250 xg离心5分钟,去除上清。

                6.2.7用适量的※培养基重悬细胞后,即可按常规细胞培养方法接种P0代细胞培养。

                * 消化后蛋的原代细胞,建议培养时接种密度提高到10,000/cm2以上;传代后即可按遁法常规的接种密度培养。

                6.3 UC-MSC传代︾培养与冻存

                6.3.1待细胞融和度达到约80%后进行传代(细胞不〗能太密集,否则容易分化),吸氣勢弃传代板孔中的培养基,每孔加适量DPBS轻轻冲洗1次。

                6.3.2根据培养皿适量加入重组胰酶-EDTA(货号:03-079-1A,T25建议使用1ml),在37℃,5% CO2培养箱作用3~5 min(可轻拍培养瓶帮助细胞脱¤落)。

                6.3.3显微镜下观察细胞完全脱落后,使用5-10ml稀释大豆胰酶抑制剂(SBTI, 货号:03-048-1,1X),1000rpm离心3~5min。

                6.3.4谨慎吸出上清,细胞团块用适当体积的完全培养基實力悬浮后,混匀细胞◤悬液。

                6.3.5按照所需的比例进行传代或按照5000-6000cells/cm2的细胞密度将细胞接种至培养器皿中,放入37℃, 5% CO2培养箱内培■养。

                6.3.6每2-3天更换一次培养基,待细胞融合神界之門度达到80%左右时,参照操作步骤6.3.1~6.3.5做细胞传代;或者参照操作步骤6.3.1~6.3.3收获细胞冻存。

                6.3.7细胞冻存:将细胞团块悬浮于适量 (0.5~1×106cells/ml) D10无血清 冻存液(货号:05-713-1)中,装入仙冻存管,2~8℃冰箱放置30min,-80℃冰箱放置 24h,转入液氮罐冻存。

                :本方法仅供参考,用户可№根据自身经验做合理调整。

                附图:(如下是组织块法,建议客户可以尝试消化法)

                 

                        

                 图1剔除脐带3根动静脉血管            图2细胞从组织块边沿爬出

                         

                图3细胞聲音傳了過來快速增殖                            图4传代时机成熟

                产品官网链接:https://www.bioind.com/worldwide/nutristem-msc-medium/

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